重组蛋白G磁珠(rProtein G Magnetic Beads)本产品将重组Protein G高密度氨基偶联到磁性琼脂糖微球表面,具有高载量,高特异性,高回收率和低非特异吸附的特性。可结合293/CHO细胞培养上清、杂交瘤细胞上清、小鼠腹水和血清等样本中的IgG或带有FC标签的重组蛋白。重组Protein G只保留了C1,C2和C3三个抗体特异结合的结构域,降低了非特异性吸附,因此通过一步结合和洗脱即可得到纯度大于90%的目的蛋白。
Protein G可用于纯化不能与Protein A很好结合的哺乳动物IgG。相对于Protein A,Protein G对于大多数哺乳动物的IgG有着更高的亲和力,尤其是对于人 IgG3,小鼠IgG1和大鼠 IgG2a。
Protein A和Protein G与不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力不一样,具体可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别。
Table 1 :rProtein G Magnetic Beads 参数和性能指标
磁珠密度
0.95-1.05 g/mL纯磁珠
磁珠浓度
380-580个/mg纯磁珠
磁响应速度
≤ 45 s
粒径
20-80um
rProtein A偶联方式
氨基偶联
载量
hIgG≥50 mg/ml(100%磁珠)
保存缓冲液
20%乙醇
保存温度
2-8℃
Table 2 :试剂和规格
产品名称
试剂名称
规格
数量
保存条件
rProtein G Magnetic Beads
10% v/v磁珠
10ml
1
2-8℃
10% v/v磁珠
50ml
1
2-8℃
使用须知
本产品须与磁性分离设备配套使用
磁珠使用前要混合震荡均匀
磁珠预处理要充分
孵育时要保持磁珠处于悬浮状态,以保持最大结合效率
在使用及保存磁珠过程中,禁止磁珠长时间干燥
禁止冷冻,离心磁珠,防止对磁珠产生不可逆的损伤
建议磁珠仅重复纯化同种蛋白
应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗
用后及时再生,避免将磁珠长时间置于低pH的缓冲液中,避免磁珠长菌
使用方法
Ø 样品预处理(以纯化1ml小鼠腹水为例,目标抗体约1-2mg)
用Wash Buffer将小鼠腹水稀释3-5倍。(杂交瘤细胞培养上清可使用Wash Buffer调节pH至7.0-8.0。)
Ø 磁珠预处理
颠倒混匀磁珠,吸取2mL 10%(v/v)磁珠于准备好的5ml EP管内,
放置在磁力架上,静置1min,吸弃上清;
加入与10%磁珠等体积的Wash Buffer 2ml(这里的等体积是指磁珠加保存液的总体积),取下EP管,颠倒混匀1min;
放置在磁力架上,静置1min,吸弃上清;
重复1次。
Ø 结合
将1ml小鼠腹水(pH7.0-8.0)用Wash Buffer稀释3倍至4ml,加入至装有磁珠的EP管中,颠倒混匀,室温缓慢旋转孵育1h(具体时间可根据结合效果调整)。
Ø 洗涤
将装有磁珠跟样本的EP管放置在磁力架上,静置1min,吸弃上清,加入与磁珠等体积的Wash Buffer(2ml),颠倒混匀1min,静置在磁力架1min,吸弃上清;
重复5次。
Ø 洗脱
加入3-5倍磁珠体积(2ml 10% v/v磁珠的磁珠体积是200ul)的Elution Buffer(600ul),室温缓慢旋转洗脱10min;
静置在磁力架上,吸走上清,得到洗脱1;
再加入3-5倍磁珠体积(2ml 10% v/v磁珠的磁珠体积是200ul)的Elution Buffer(600ul),室温缓慢旋转洗脱10min;
静置在磁力架上,吸走上清,得到洗脱2;
向洗脱的上清中加入1/10 Elution Buffer体积的Neutralization Buffer(60ul)。
分别测洗脱1和洗脱2的浓度,根据需要的抗体浓度决定是否混合。
Ø 磁珠再生 (以再生2ml 10%v/v磁珠为例)
(1)将磁珠置于磁力架上,吸弃上清,向EP管内加入与10%磁珠等体积的Elution Buffer(2ml),室温缓慢旋转5min,静置在磁力架上,吸弃上清;
(2)向EP管内加入与10%磁珠等体积的Wash Buffer(2ml),再加入1%(v/v)TritionX-100,室温缓慢旋转10min,静置在磁力架上,吸弃上清;
(3)向EP管内加入与10%磁珠等体积的Wash Buffer(2ml),室温缓慢旋转2min,静置在磁力架上,吸弃上清,重复一次;
(4)向EP管内加入1.8ml 20%乙醇,使磁珠的浓度保持在10% (v/v) ,4℃保存。
订购信息
产品名称
规格
货号
rProtein A Magnetic Beads
10ml, 10%(v/v)
MG101
rProtein A Magnetic Beads
50ml, 10%(v/v)
MG102
rProtein G Magnetic Beads
10ml, 10%(v/v)
MG201
rProtein G Magnetic Beads
50ml, 10%(v/v)
MG202
Ni NTA Magnetic Beads
10ml, 10%(v/v)
MG301
Ni NTA Magnetic Beads
50ml, 10%(v/v)
MG302
Ni TED Magnetic Beads
10ml, 10%(v/v)
MG401
Ni TED Magnetic Beads
50ml, 10%(v/v)
MG402