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重组蛋白G磁珠
    发布时间: 2023-10-30 09:14    

重组蛋白G磁珠(rProtein G Magnetic Beads)本产品将重组Protein G高密度氨基偶联到磁性琼脂糖微球表面,具有高载量,高特异性,高回收率和低非特异吸附的特性。可结合293/CHO细胞培养上清、杂交瘤细胞上清、小鼠腹水和血清等样本中的IgG或带有FC标签的重组蛋白。重组Protein G只保留了C1,C2和C3三个抗体特异结合的结构域,降低了非特异性吸附,因此通过一步结合和洗脱即可得到纯度大于90%的目的蛋白。

Protein G可用于纯化不能与Protein A很好结合的哺乳动物IgG。相对于Protein A,Protein G对于大多数哺乳动物的IgG有着更高的亲和力,尤其是对于人 IgG3,小鼠IgG1和大鼠 IgG2a。

Protein A和Protein G与不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力不一样,具体可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别。


Table 1:rProtein G Magnetic Beads 参数和性能指标

 

磁珠密度

0.95-1.05 g/mL纯磁珠

磁珠浓度

380-580个/mg纯磁珠

磁响应速度

≤ 45 s

粒径

20-80um

rProtein A偶联方式

氨基偶联

载量

hIgG≥50 mg/ml(100%磁珠)

保存缓冲液

20%乙醇

保存温度

2-8℃


Table 2:试剂和规格

 

产品名称

试剂名称

规格

数量

保存条件

rProtein G Magnetic   Beads

10% v/v磁珠

10ml

1

2-8℃

10% v/v磁珠

50ml

1

2-8℃

使用须知

本产品须与磁性分离设备配套使用

磁珠使用前要混合震荡均匀

磁珠预处理要充分

孵育时要保持磁珠处于悬浮状态,以保持最大结合效率

在使用及保存磁珠过程中,禁止磁珠长时间干燥

禁止冷冻,离心磁珠,防止对磁珠产生不可逆的损伤

建议磁珠仅重复纯化同种蛋白

应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗

用后及时再生,避免将磁珠长时间置于低pH的缓冲液中,避免磁珠长菌



使用方法



Ø  样品预处理(以纯化1ml小鼠腹水为例,目标抗体约1-2mg)

用Wash Buffer将小鼠腹水稀释3-5倍。(杂交瘤细胞培养上清可使用Wash Buffer调节pH至7.0-8.0。)

Ø  磁珠预处理

颠倒混匀磁珠,吸取2mL 10%(v/v)磁珠于准备好的5ml EP管内,

放置在磁力架上,静置1min,吸弃上清;

加入与10%磁珠等体积的Wash Buffer 2ml(这里的等体积是指磁珠加保存液的总体积),取下EP管,颠倒混匀1min;

放置在磁力架上,静置1min,吸弃上清;

重复1次。

Ø  结合

将1ml小鼠腹水(pH7.0-8.0)用Wash Buffer稀释3倍至4ml,加入至装有磁珠的EP管中,颠倒混匀,室温缓慢旋转孵育1h(具体时间可根据结合效果调整)。

Ø  洗涤

将装有磁珠跟样本的EP管放置在磁力架上,静置1min,吸弃上清,加入与磁珠等体积的Wash Buffer(2ml),颠倒混匀1min,静置在磁力架1min,吸弃上清;

重复5次。

Ø  洗脱

加入3-5倍磁珠体积(2ml 10% v/v磁珠的磁珠体积是200ul)的Elution Buffer(600ul),室温缓慢旋转洗脱10min;

静置在磁力架上,吸走上清,得到洗脱1;

再加入3-5倍磁珠体积(2ml 10% v/v磁珠的磁珠体积是200ul)的Elution Buffer(600ul),室温缓慢旋转洗脱10min;

静置在磁力架上,吸走上清,得到洗脱2;

向洗脱的上清中加入1/10 Elution Buffer体积的Neutralization Buffer(60ul)。

分别测洗脱1和洗脱2的浓度,根据需要的抗体浓度决定是否混合。

Ø  磁珠再生(以再生2ml 10%v/v磁珠为例)

(1)将磁珠置于磁力架上,吸弃上清,向EP管内加入与10%磁珠等体积的Elution Buffer(2ml),室温缓慢旋转5min,静置在磁力架上,吸弃上清;

(2)向EP管内加入与10%磁珠等体积的Wash Buffer(2ml),再加入1%(v/v)TritionX-100,室温缓慢旋转10min,静置在磁力架上,吸弃上清;

(3)向EP管内加入与10%磁珠等体积的Wash Buffer(2ml),室温缓慢旋转2min,静置在磁力架上,吸弃上清,重复一次;

(4)向EP管内加入1.8ml 20%乙醇,使磁珠的浓度保持在10% (v/v) ,4℃保存。


订购信息


产品名称

规格

货号

rProtein A Magnetic Beads

10ml, 10%(v/v)

MG101

rProtein A Magnetic Beads

50ml, 10%(v/v)

MG102

rProtein G Magnetic Beads

10ml, 10%(v/v)

MG201

rProtein G Magnetic Beads

50ml, 10%(v/v)

MG202

Ni NTA Magnetic Beads

10ml, 10%(v/v)

MG301

Ni NTA Magnetic Beads

50ml, 10%(v/v)

MG302

Ni TED  Magnetic Beads

10ml, 10%(v/v)

MG401

Ni TED  Magnetic Beads

50ml, 10%(v/v)

MG402



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