磁珠的参数和指标见Table 1，产品规格见 Table 2。
Table 1：GSH磁珠参数和性能指标
基质 | 琼脂糖 |
配基 | Protein L |
粒径 | 10-37μm |
GST 融合蛋白结合能力（载量） | ≥5mg/mL（磁珠纯体积） |
磁珠浓度 | 20%（v/v） |
储存温度 | 2-8℃ |
保质期 | 2年 |
Table 2：产品规格
产品名称 | 货号 | 磁珠浓度 | 规格 |
GSH磁珠 | MG701 | 20% v/v磁珠 | 5ml |
MG702 | 20% v/v磁珠 | 50ml |
注意：GSH磁珠，2-8℃ 保存，不要冷冻，禁止磁珠在储存和使用过程中变干。
使用须知
本产品须与磁性分离器配套使用
磁珠使用前要混合震荡均匀
磁珠预处理要充分
孵育时要保持磁珠处于悬浮状态，以保持最大结合效率
在使用及保存磁珠过程中，禁止磁珠长时间干燥
禁止冷冻，离心磁珠，防止对磁珠产生不可逆的损伤
建议磁珠仅重复纯化同种蛋白
应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗
用后及时再生，避免将磁珠长时间置于低pH的缓冲液中，避免磁珠长菌
应用场景
适用于GST标签融合蛋白的纯化，配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
使用方法
实验前准备
推荐缓冲液
Binding/ Wash Buffer | PBS，pH7.4（137mM NaCl，2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4） |
Elution Buffer | 50mM Tris-HCl，10-20mM 还原型谷胱甘肽，pH8.0（现配现用） |
Storage buffer | PBST（含0.05% NaN3）或20%乙醇 |
操作步骤
以大肠杆菌表达的GST标签融合蛋白的纯化为例
样品处理
1) 将收集到的菌体，加入适量体积的Binding buffer，加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为
1mM 的PMSF）；加入溶菌酶，使终浓度为0.2-0.4mg/mL。
2) 将菌体悬浮起来，置于冰上进行超声波破碎，如果破碎后的样本过于粘稠，可加入适
量核酸酶在冰上孵育30mins，获得的即为粗蛋白样品。
磁珠预处理
1) 磁珠的使用量可根据目标蛋白产量来计算，磁珠使用量可稍过量，如目标蛋白预估产
量为5mg，则加入5-10mL（20%，v/v）磁珠。
2) 磁珠平衡：将磁珠充分涡旋混匀，然后立即取出所需磁珠加入到离心管中，置于磁力
架上磁吸，吸弃上清液；加入与悬浮磁珠等体积的Binding buffer，涡旋15s，然后置于磁
力架上磁吸，澄清后，可翻转离心管（保持离心管在磁力架上），使离心管盖上残留的磁
珠润洗下来，待上清澄清后去掉上清液，重复洗涤2 次。
结合
将粗蛋白样品加入到上述平衡后的磁珠管中，盖上管盖，将磁珠置于旋转混匀仪上室
温混合20-30mins（如有需要，也可于2-8℃下旋转混合1h）。
漂洗
1) 将上述离心管置于磁力架上，待上清澄清后，吸取上清液至新的离心管中以备检测。
2) 加入等体积的Wash buffer 重悬磁珠，吹打5-10 次或旋转2mins，然后将离心管置于
磁力架上，上清澄清后，吸取上清液到新的离心管中以备检测，重复该洗涤步骤至少2 次。
洗脱
1) 根据需要，加入适量的Elution Buffer 于磁珠管中，吹打混匀后，将离心管置于旋转
仪上混合5-10mins；
2) 将离心管置于磁力架上，待上清澄清，吸取上清液保存备用；如有需要，可重复该步
骤一次，收集样品到新的离心管中，以检测目标蛋白是否完全洗脱。
磁珠保存
1) 向磁珠中加入Elution Buffer，涡旋震荡30s，然后磁吸去上清，共洗涤3 次；
2) 向磁珠中加入4 倍磁珠体积的20%乙醇，置于2-8℃保存。
流程优化
上述流程为推荐流程，根据目标蛋白的不同，可从以下几个方面进行流程上的优化，
以获得更高的回收率和纯度。
1) 调整粗蛋白浓度，如蛋白浓度过低，则不利于蛋白的回收；
2) 调整磁珠用量、孵育时间、洗脱时间、洗脱次数等；
3) 缓冲液中加入1~10mM 的DTT，有利于部分GST 标签蛋白与磁珠的结合；
4) 缓冲液中加入0.05%的Tween-20 可降低磁珠和离心管对非特异蛋白的吸附。
