酵母表面展示技术平台(yeast surface display platform)

规模化量产 · 无动物源重组蛋白原料

年产50吨白蛋白 | 批间稳定 | 全球合规 — 专注CGT与生物制药核心原料

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酵母表面展示技术平台

知禾提供基于流式分选技术（FACS）的酵母表面展示体系的文库高通量筛选技术平台，满足客户需要兼顾亲和力前置分级筛选的抗体开发要求。
知禾通过免疫双峰驼、羊驼（Alpaca）、小鼠等试验动物，提供纳米抗体和ScFv抗体定制服务。也可以针对特定抗体构建突变文库，筛选得到更高亲和力的抗体。可以设计完成靶点蛋白制备、动物免疫、酵母展示文库构建、磁珠及流式筛选、阳性抗体表达载体转换、阳性抗体与靶细胞结合验证等一站式解决方案，满足客户的全方位需求。
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产品简介

知禾提供基于流式分选技术（FACS）的酵母表面展示体系的文库高通量筛选技术平台，满足客户需要兼顾亲和力前置分级筛选的抗体开发要求。

知禾通过免疫双峰驼、羊驼（Alpaca）、小鼠等试验动物，提供纳米抗体和ScFv抗体定制服务。也可以针对特定抗体构建突变文库，筛选得到更高亲和力的抗体。可以设计完成靶点蛋白制备、动物免疫、酵母展示文库构建、磁珠及流式筛选、阳性抗体表达载体转换、阳性抗体与靶细胞结合验证等一站式解决方案，满足客户的全方位需求。

技术原理

酵母表面展示(yeast surface display, YSD)是一种将外源蛋白基因与酵母细胞表面蛋白基因融合，使外源蛋白表达并锚定在酵母细胞表面的真核展示系统。作为真核系统，能对展示的蛋白进行糖基化、磷酸化等翻译后修饰，更易保证蛋白的天然构象和生物活性。以及酵母细胞易培养、操作简便。是目前广泛使用的细胞表面展示技术。与流式细胞分选相结合，筛选出与靶向抗原特异结合的抗体。

知禾的酵母表面展示技术采用“α-凝集素”展示系统，将纳米抗体基因序列和表达标签c-myc tag基因序列插入至蛋白质支架-Aga2基因的展示质粒载体中，该载体使用营养标记物在酵母中维持选择性生长，并通过培养基中加入半乳糖诱导酵母进行表面展示，纳米抗体融合蛋白被分泌并锚定在酵母细胞壁上。再结合磁珠及流式分选技术进行多轮筛选，可筛选得到高亲和力、高稳定性的克隆。

基于α-凝集素的Saccharomyces cerevisiae 酵母表面展示系统示意图

知禾通过免疫双峰驼、羊驼（Alpaca）、小鼠等试验动物，提供纳米抗体和ScFv抗体定制服务。也可以针对特定抗体构建突变文库，筛选得到更高亲和力的抗体。可以设计完成靶点蛋白制备、动物免疫、酵母展示文库构建、磁珠及流式筛选、阳性抗体表达载体转换、阳性抗体与靶细胞结合验证等一站式解决方案，满足客户的全方位需求。

服务流程与周期

步骤	服务内容	交付内容	周期
动物免疫	动物免疫4针，加强免疫一针，共计免疫5针。免疫前采集阴性血清。从第3针开始采血，ELISA检测血清效价。效价合格，采血分离PBMC。	免疫动物PBMC细胞。效价检测结果。	5-8周
cDNA制备	PBMC总RNA提取。 RT-PCR制备cDNA。	Total RNA。 cDNA。	1-3天
文库构建	以文库cDNA为模板，PCR法扩增抗体基因。电击转化抗体基因片段和酵母展示载体，构建文库。计算库容。随机挑选克隆，PCR鉴定文库阳性率。	文库随机测序结果。酵母展示文库（库容108-109、文库插入率＞90%）。	2-3周
文库筛选	3-5轮磁珠筛选及荧光标记蛋白FACS筛选。挑取96个单克隆诱导表达，流式检测阳性克隆。阳性克隆基因测序。	各轮筛选结果。单克隆与靶蛋白结合流式分析结果。至少5个独特HCDR3的序列。	5-6周
载体转换	阳性克隆构建转换为真核表达载体。	转换至真核表达载体的阳性克隆菌种。	1周
细胞结合验证	阳性克隆小量转染细胞表达。小量表达抗体上清流式检测与靶细胞结合。选择高结合的抗体克隆大量转染细胞表达。大量表达抗体纯化、定量。纯化后抗体流式检测与靶细胞结合EC50。	纯度、浓度合格的纯化抗体。小量表达抗体流式检测结果。纯化抗体EC50流式检测结果。	3周
抗体亲和力测定	BLI检测抗体亲和力。	检测结果。	1-2周