铁是生命活动中不可或缺的重要元素。
血红蛋白、细胞色素和过氧化氢酶等含铁蛋白或酶参与了所有真核生物和大多数微生物的呼吸、DNA合成和许多其他关键代谢过程。
细胞缺铁会导致细胞停止增殖,甚至是细胞死亡,而过量的铁会产生高活性羟基自由基,对细胞造成氧化损伤,同样对细胞生长有害。
因此,维持铁的稳态是几乎所有生物体都要具备的能力,通常由一种统称为转铁蛋白家族的铁载体糖蛋白严格控制细胞铁的摄取、储存和运输。
转铁蛋白家族包括转铁蛋白,乳转铁蛋白和黑色素转铁蛋白等。
人转铁蛋白
转铁蛋白(Transferrin,TRF、Tf)主要在肝脏中产生,在血浆、胆汁、羊水、脑脊液、淋巴液和乳汁等体液中广泛存在,尤其在血浆中含量最高。
转铁蛋白一共有两个铁离子结合位,每个结合位可以与一个铁离子结合。在羧基端(C端)的结合位与铁离子有很高的亲和力,只会与铁离子结合;在氨基端(N端)的结合位则是可以与其他离子如铁、铬、锰、镉、镍等结合。
在不同研究中,按其含铁数目,分普通转铁蛋白或铁饱和转铁蛋白、单铁转铁蛋白、脱铁转铁蛋白。
转铁蛋白是体液中不可缺少的成分,除参与铁的运输与代谢,还参与呼吸、细胞增殖和免疫系统的调节,还能调节铁离子平衡和能量平衡,更具有抗菌杀菌的保护功能,因而转铁蛋白具有较全面的蛋白质生理功能。
转铁蛋白的主要生理功能是把铁离子从吸收和储存的地方运输到红细胞供合成血红蛋白用,或输送到机体的其他需铁部位。
转铁蛋白还具有抗菌的活性,作为先天免疫系统的一部分,转铁蛋白与铁的结合会阻碍细菌的存活。
转铁蛋白还可以抑制GM-CSF,参与细胞调节,具有免疫调节活性。
转铁蛋白还是生长因子,所以几乎所有细胞株在无血清培养时,都需要添加转铁蛋白以确保细胞的生长和增殖,并且不同类型的细胞对转铁蛋白结合物的反应不同,结果会分化成不同的细胞。
并且转铁蛋白或者转铁蛋白受体介导的药物传递在临床上效果很好,因此转铁蛋白越来越受到人们的关注,而传统人或动物血浆来源的转铁蛋白的缺点也逐渐显现出来。
血源供应存在困难,在面临全球公共卫生事件时尤其如此;有感染肝炎病毒和艾滋病病毒等的危险,也限制了血浆来源的转铁蛋白的应用;转铁蛋白在同一种动物中表现出多态性,分子存在大小差异,这可能导致批次间不稳定。
利用基因工程技术让人转铁蛋白基因在宿主中高效表达,既能大量获得重组转铁蛋白,又能克服从血清中获取的转铁蛋白的种种缺点。
重组人转铁蛋白
多年来,人们已经尝试过各种不同的宿主,包括大肠杆菌表达系统、酵母表达系统、昆虫细胞表达系统、真核细胞表达系统、动植物表达系统等。
但由于人转铁蛋白结构相对复杂,重组人转铁蛋白生产也面临一些挑战:制备成本较高,需要设备和技术支撑;表达和纯化过程较为复杂,需要对表达条件进行优化和调节;重组人转铁蛋白的稳定性和活性等性质需要进一步研究和优化。
大肠杆菌系统由于不含粗糙内质网及高尔基体,蛋白糖基化存在问题,需要进行复性,产率低,且包涵体不易溶解。
酵母表达系统培养条件普通,生长繁殖速度迅速,成本低,是重组转铁蛋白很好的表达系统。
细胞表达系统可表达有活性的重组人转铁蛋白,但昆虫细胞表达系统表达量低,真核细胞表达系统成本高,均无法进行大规模生产。
动植物表达系统是利用转基因植物或者大动物生物反应器,生产重组人转铁蛋白,产量大,成本低。植物方面,叶片类宿主生产的外源蛋白易发生水解保存和运输难度较大;种子类宿主在开花授粉等过程中可能造成基因污染;果实类宿主不易保存;根茎类宿主较为合适。动物方面,转基因技术难度大、存在位置效应和剂量效应、受制于动物自身表达水平和泌乳水平等因素都限制了其用于大规模生产
知禾重组人转铁蛋白产品
知禾提供重组人转铁蛋白产品。本产品是利用基因重组技术在毕赤酵母中表达重组人转铁蛋白,进行纯化得到的,不含有动物源成分,无任何血源性病毒感染风险,批稳定性高。
知禾提供全铁转铁蛋白即铁饱和转铁蛋白和脱铁转铁蛋白两种产品,满足不同培养基的需要。
规格参数
重组转铁蛋白(脱铁) | 重组转铁蛋白 (全铁) |
产品货号 | ART201S | 产品货号 | ART202S |
产品来源 | 重组毕赤酵母 | 产品来源 | 重组毕赤酵母 |
外观 | 类白色粉末 | 外观 | 粉红色至红色粉末 |
纯度 | ≥98% | 纯度 | ≥98% |
规格 | 1g,10g | 规格 | 1g,10g |
分子量 | ~75kDa | 分子量 | ~75kDa |
铁含量 | ≤0.005% | 铁含量 | 0.10%-0.35% |
pH | 6.0-8.0 | pH | 6.0-8.0 |
内毒素 | ≤0.5EU/mg | 内毒素 | ≤0.5EU/mg |
CAS | 11096-37-0 | CAS | 11096-37-0 |
MDL | MFCD00131337 | MDL | MFCD00131337 |
使用方法
复溶:一般用 PBS 或者其它合适的溶剂在室温下将转铁蛋白干粉溶解成储液,浓度在 0.5-2.0mg/mL,然后用无菌滤膜进行过滤,滤液可在无菌条件下 2-8°C 保存 30 天。
运输和保存方法
冰袋运输。2-8°C,避光防潮密闭干燥,有效期 24 个月
应用领域
可用于动物细胞培养。
注意事项
本产品仅用于科研、实验室和生产使用,非临床治疗使用,不得用于动物及人体
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