磁珠的参数和指标见Table 1，产品规格见 Table 2。
Table 1：抗 Myc 磁珠参数和性能指标
基质 | 琼脂糖 |
粒径 | 10-40μm |
载量 | ≥1mg/mL（磁珠纯体积） |
磁珠浓度 | 20%（v/v） |
储存温度 | 2-8℃ |
保存液 | 1xPBS，含0.03% NaN3 |
保质期 | 2年 |
Table 2：产品规格
产品名称 | 货号 | 磁珠浓度 | 规格 |
抗 Myc 磁珠 | MG1101 | 20% v/v磁珠 | 5ml |
MG1102 | 20% v/v磁珠 | 50ml |
注意：抗 Myc 磁珠，2-8℃ 保存，不要冷冻，禁止磁珠在储存和使用过程中变干。
使用须知
本产品须与磁性分离器配套使用
磁珠使用前要混合震荡均匀
磁珠预处理要充分
孵育时要保持磁珠处于悬浮状态，以保持最大结合效率
在使用及保存磁珠过程中，禁止磁珠长时间干燥
禁止冷冻，离心磁珠，防止对磁珠产生不可逆的损伤
建议磁珠仅重复纯化同种蛋白
应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗
使用本产品进行IP 实验前，需先确认样品中HA 融合蛋白的表达情况。
在进行细胞或菌体裂解时不要使用含DTT的裂解液，防止造成磁珠上Anti-HA 抗体脱落
应用场景
适用于HA-Tag融合蛋白的纯化，配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
使用方法
实验前准备
推荐缓冲液:
Binding/ Wash Buffer | 50mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 0.5% Tween-20, pH7.4 |
Elution Buffer A | 0.1M Glycine, pH 2.5 |
Elution Buffer B | 2mg/mL c-Myc-Peptide, 50mM Tris, 150mM NaCl, pH 7.4 |
Neutralization Buffer | 1M Tris-HCl, pH 8.0 |
操作步骤
样品处理
样品可以是细菌发酵液或者细胞裂解液，裂解完成后样品溶液中不能含有颗粒不溶物，可以用0.22μm 滤膜过滤或10,000×g 离心15mins。
磁珠预处理
充分混匀Anti-c-Myc 磁珠，取10-25μL 磁珠悬液，置于1.5mL EP 管中，加入500μL 结合/清洗缓冲液，充分混悬后置磁力架上磁性分离弃上清。重复该操作2 次。
结合
在清洗后的磁珠悬液中加入500μL 细胞裂解液，充分混悬，置于翻转混合仪孵育，室温孵育2 小时或者4°C 条件下孵育过夜。置于磁力架上磁性分离，弃上清。
漂洗
在上述分离得到的磁珠中加入1mL 洗涤缓冲液，充分混悬磁珠，磁性分离，弃上清。重复该操作3 次。
洗脱
根据下游用途，本说明提供三种洗脱方法：
a. 变性洗脱法：
如需直接检测目的蛋白，则在上述洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入50μL 1×SDS-PAGE 上样缓冲液，煮沸5mins，冷却至室温后进行磁性分离取上清进行SDS-PAGE 检测。
b. 酸性洗脱法：
向洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入50μL 的洗脱液A 混合均匀， 室温震荡混10mins。分离磁珠，收集上清至新EP 管，按洗脱液:中和液=5:1 的比例加入中和液，调节洗脱液pH 至中性。
c. 竞争性洗脱法：
向洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入50μL 的洗脱液A 混合均匀，室温孵育1 小时或者4°C 条件下孵育2-4h。分离磁珠，收集上清至新EP 管，即为目的蛋白。
注：可重复洗脱步骤以获得更高的回收率
