背景信息
GSH磁珠（GSH Magnetic Beads），是由长臂环氧基活化的顺磁性琼脂糖微球与还原性谷胱甘肽共价偶联形成的复合微粒，其配体能够特异性的结合谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合蛋白，该产品可通过磁性设备一步式快速获得GST 标签蛋白。尤其适用于同时纯化多个样品，样本和磁珠的体积范围也可灵活的调整，纯化的过程能够简便的放大，配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
技术指标
磁珠的参数和指标见Table 1，产品规格见 Table 2。
Table 1：GSH磁珠参数和性能指标
基质 | 琼脂糖 |
配基 | Protein L |
粒径 | 10-37μm |
GST 融合蛋白结合能力（载量） | ≥5mg/mL（磁珠纯体积） |
磁珠浓度 | 20%（v/v） |
储存温度 | 2-8℃ |
保质期 | 2年 |
Table 2：产品规格
产品名称 | 货号 | 磁珠浓度 | 规格 |
GSH磁珠 | MG701 | 20% v/v磁珠 | 5ml |
MG702 | 20% v/v磁珠 | 50ml |
注意：GSH磁珠，2-8℃ 保存，不要冷冻，禁止磁珠在储存和使用过程中变干。
使用须知
使用方法
实验前准备
推荐缓冲液
Binding/ Wash Buffer | PBS，pH7.4（137mM NaCl，2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4） |
Elution Buffer | 50mM Tris-HCl，10-20mM 还原型谷胱甘肽，pH8.0（现配现用） |
Storage buffer | PBST（含0.05% NaN3）或20%乙醇 |
操作步骤
以大肠杆菌表达的GST标签融合蛋白的纯化为例
样品处理
1) 将收集到的菌体，加入适量体积的Binding buffer，加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为
1mM 的PMSF）；加入溶菌酶，使终浓度为0.2-0.4mg/mL。
2) 将菌体悬浮起来，置于冰上进行超声波破碎，如果破碎后的样本过于粘稠，可加入适
量核酸酶在冰上孵育30mins，获得的即为粗蛋白样品。
磁珠预处理
1) 磁珠的使用量可根据目标蛋白产量来计算，磁珠使用量可稍过量，如目标蛋白预估产
量为5mg，则加入5-10mL（20%，v/v）磁珠。
2) 磁珠平衡：将磁珠充分涡旋混匀，然后立即取出所需磁珠加入到离心管中，置于磁力
架上磁吸，吸弃上清液；加入与悬浮磁珠等体积的Binding buffer，涡旋15s，然后置于磁
力架上磁吸，澄清后，可翻转离心管（保持离心管在磁力架上），使离心管盖上残留的磁
珠润洗下来，待上清澄清后去掉上清液，重复洗涤2 次。
结合
将粗蛋白样品加入到上述平衡后的磁珠管中，盖上管盖，将磁珠置于旋转混匀仪上室
温混合20-30mins（如有需要，也可于2-8℃下旋转混合1h）。
漂洗
1) 将上述离心管置于磁力架上，待上清澄清后，吸取上清液至新的离心管中以备检测。
2) 加入等体积的Wash buffer 重悬磁珠，吹打5-10 次或旋转2mins，然后将离心管置于
磁力架上，上清澄清后，吸取上清液到新的离心管中以备检测，重复该洗涤步骤至少2 次。
洗脱
1) 根据需要，加入适量的Elution Buffer 于磁珠管中，吹打混匀后，将离心管置于旋转
仪上混合5-10mins；
2) 将离心管置于磁力架上，待上清澄清，吸取上清液保存备用；如有需要，可重复该步
骤一次，收集样品到新的离心管中，以检测目标蛋白是否完全洗脱。
磁珠保存
1) 向磁珠中加入Elution Buffer，涡旋震荡30s，然后磁吸去上清，共洗涤3 次；
2) 向磁珠中加入4 倍磁珠体积的20%乙醇，置于2-8℃保存。
流程优化
上述流程为推荐流程，根据目标蛋白的不同，可从以下几个方面进行流程上的优化，
以获得更高的回收率和纯度。
1) 调整粗蛋白浓度，如蛋白浓度过低，则不利于蛋白的回收；
2) 调整磁珠用量、孵育时间、洗脱时间、洗脱次数等；
3) 缓冲液中加入1~10mM 的DTT，有利于部分GST 标签蛋白与磁珠的结合；
4) 缓冲液中加入0.05%的Tween-20 可降低磁珠和离心管对非特异蛋白的吸附。
运输与储存
冰袋运输。
产品应于 2–8℃ 条件下避光、密闭保存。不可冷冻，冷冻将导致磁珠聚集、性能下降。使用前充分混匀至均一状态。
应用领域
GSH磁珠利用还原型谷胱甘肽（GSH）作为亲和配基，高亲和力结合GST（谷胱甘肽S-转移酶）标签。GST标签（~26 kDa）是重组蛋白表达中最常用的融合标签之一，可促进目标蛋白的可溶性表达与折叠。以游离还原型谷胱甘肽（10 mM，pH 8.0）温和洗脱，无需低pH或高浓度竞争剂，保护蛋白天然构象。
广泛应用于：
GST标签融合蛋白纯化
免疫沉淀（IP）与免疫共沉淀（Co-IP）
蛋白-蛋白相互作用分析（pull-down）
GST pull-down检测
酶与底物相互作用研究
蛋白表达与纯化工艺开发
生物化学与结构生物学研究
与Ni-NTA（His标签）体系相比，GST/GSH体系的非特异性吸附更低，适合从细菌、酵母及哺乳动物细胞裂解液中纯化目标蛋白。GSH磁珠保留GST琼脂糖填料的核心结合特性，同时具备磁珠体系的快速分离与高通量操作优势。
产品优势
GST/GSH体系，高亲和力低背景
生理条件洗脱，保护蛋白天然构象
操作便捷，无需离心/重力柱
兼容高通量自动化纯化
非特异性吸附本底低
支持重复使用
