Ni-TED磁珠（Ni-TED Magnetic Beads）MG401 / MG402

背景信息

Ni TED Magnetic Beads 琼脂糖磁珠是一种用于纯化带有组氨酸（His）标签蛋白的新工具， 其具有超顺磁性，可通过外加磁场实现快速的分离与回收。本产品的活性基团为螯合有 Ni2+ 的TED，由于TED对镍离子超强的螯合能力，使亲和Ni-TED能够耐受高浓度的螯合剂EDTA 和还原剂DTT，适用于含有EDTA 或DTT等成分的组氨酸标记（His-Tag）的基因工程蛋白质以的分离纯化。与传统的 Ni-NTA 介质相比，Ni TED Magnetic Beads有以下优势：

操作简单且快速，无需对样品进行澄清处理，可以直接从复杂样本中捕获带有组氨酸标签的目标蛋白，极大的简化了纯化工艺和提高纯化效率

耐受EDTA或DTT等成分，适用于真核表达样品的直接纯化

耐受NaOH,无需脱镍即可清洗，大大缩短了磁珠再生时间

高纯度、高收率

易于平行重复

易于放大

技术指标

Table 1：NI TED Magnetic Beads 参数和性能指标

Table 2：试剂和规格

使用须知

• 本产品须与磁性分离设备配套使用

• 磁珠使用前要混合震荡均匀

• 磁珠预处理要充分

• 孵育时要保持磁珠处于悬浮状态，以保持最大结合效率

• 在使用及保存磁珠过程中，禁止磁珠长时间干燥

• 禁止冷冻，离心磁珠，防止对磁珠产生不可逆的损伤

• 建议磁珠仅重复纯化同种蛋白，当纯化性能降低时，可进行再生处理

• 应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗

使用方法

1. 常用缓冲液

缓冲液的配制影响目的蛋白的回收率和纯度，在纯化较大规模蛋白之前，需做好预实验，筛选出适用于目的蛋白的缓冲液体系。

在结合缓冲液中添加少量咪唑可以减少杂蛋白的吸附；洗脱时，不确定最佳洗脱咪唑浓度的情况下，推荐使用不同梯度洗脱，并收集上清液做 SDS-PAGE 电泳验证，确定合适的洗脱浓度。

2.  手动纯化流程

2.1 样品制备

细胞分泌表达的样品直接用Binding Buffer稀释2-3倍，混合均匀备用；

细胞胞内表达的样品，用 Binding Buffer 重悬，按需加入蛋白酶抑制剂（例如：终浓度为 1 mM的 PMSF），搅拌混合均匀，冰浴超声裂解细胞备用。

2.2 磁珠预处理

取一定量磁珠至 EP 管中，置于磁力架上，使磁珠沉降，移除上层的 Storage Buffer，用与Storage Buffer等体积的 Binding Buffer （例如取400ul 10% V/V的磁珠，磁珠体积是40ul， Storage Solution的体积是360ul，这里加入360ul）洗涤 2-3 次，磁性分离后加Binding Buffer调整磁珠体积比为10%，保留磁珠备用。

2.3 结合

将磁珠加入步骤 2.1 的样品中，在室温下使用混合仪或摇床翻转 EP 管，使磁珠充分的分散在样品溶液中，约30 min 后进行磁性分离，移出上清液，留样检测或废弃（对于部分易降解的蛋白，建议在 2~8℃下孵育 1 h 以上）。

2.4 漂洗

在上一步 EP 管中加入与Storage Buffer等体积的 Wash Buffer，翻转重悬磁珠后进行磁性分离，移出上清液，留样检测或废弃，可根据需要配制不同咪唑浓度的漂洗液分步漂洗。

2.5 洗脱

将与Storage Buffer等体积的 Elution Buffer 加入上一步的 EP 管中，在室温下使用垂直混合仪或手动轻柔翻转 EP 管，使磁珠充分的分散，10 min 后进行磁性分离，移取上清液至新 EP 管，可根据需要配制不同咪唑浓度的漂洗液分步漂洗。

注：建议用户在第一次洗脱后再重复洗脱 1-2 次，确保目的蛋白充分回收；微球上 90%结合的目的蛋白在第一次洗脱时会被洗脱，因此，之后的洗脱时间及洗脱液体积均可自定义，翻转混合均匀后磁性分离即可。

2.6 磁珠后处理

使用后的磁珠用 Elution Buffer 洗涤 2 次，磁性分离后移除上清液；之后用去离子水洗

涤 2 次，磁性分离后移除上清液；加入 Storage Solution 使磁珠浓度为 10%（v/v），置于 2-8℃保存。

3. 磁珠再生

Ni TED Magnetic Beads 琼脂糖磁珠在连续使用 8~10 次后，若出现载量明显下降的现象时，表明螯合的 Ni2+有部分脱落，建议进行再生处理，需准备以下缓冲液。

具体操作流程如下：

（1）取结合性能降低的磁珠至 EP 管中，磁性分离移除上清液，加入与3倍磁珠体积的 Beads Washing Buffer 1，重悬磁珠，室温混合 30 min，磁性分离，去除上清液；

（2）加入与3倍磁珠体积的Beads Washing Buffer 2，手动翻转 EP 管使磁珠重悬，1min后磁性分离后移除上清液，重复 3 -5次，洗至中性；

（3）加入3倍磁珠体积的Beads Washing Buffer 3，在室温下使用混合仪翻转 EP 管，使磁珠重悬，5 min 后磁性分离移除上清液；

（4）加入3倍磁珠体积的去离子水，手动翻转 EP 管使磁珠重悬，磁性分离后移除上清液，重复 3~5 次 。

（5）磁性分离后移除上清液，加入 Storage Solution 使磁珠浓度为 25%（v/v），置于 2-8℃保存。

运输与储存

冰袋运输。

产品应于 2–8℃ 条件下避光、密闭保存。不可冷冻，冷冻将导致磁珠聚集、性能下降。使用前充分混匀至均一状态。

应用领域

Ni-TED磁珠以TED（Tris(carboxymethyl)ethylenediamine，三羧甲基乙二胺）五齿螯合固定镍离子。TED配基占据Ni²⁺五个配位位点，仅剩余一个位点开放供His标签结合。五齿螯合的几乎完全包裹使镍离子结合极稳，避免了与溶液中还原剂或EDTA的竞争性解离。关键优势：在含还原剂（≤10 mM DTT、≤20 mM β-ME）或EDTA（≤10 mM）的缓冲体系中可保持稳定结合，无需去除还原剂即可直接上样。

广泛应用于：

• His标签融合蛋白纯化

• 含DTT/EDTA样品直接纯化

• 真核分泌表达（CHO、酵母、昆虫细胞）样品

• 对镍离子泄漏敏感的下游应用

• 免疫沉淀（IP）与免疫共沉淀（Co-IP）

• 蛋白-蛋白相互作用分析（pull-down）

• 高通量蛋白纯化筛选

• 蛋白复合物结构生物学研究

• NaOH在位清洗再生（≤1 M），无需先剥镍，简化CIP流程

TED五齿螯合镍结合极稳，Ni²⁺泄漏趋近于零，回收蛋白的镍残留量更低、更适于对金属离子敏感的功能研究及细胞级实验。Ni-TED磁珠与Ni-NTA磁珠（MG301/MG302）互补：NTA四齿螯合载量更高适合常规纯化，TED五齿螯合化学耐受性优异适合挑战性样品体系。

产品优势

• TED五齿螯合，极低镍离子泄漏

• 耐受DTT/β-ME还原剂及EDTA

• 可直接处理CHO/酵母分泌表达上清

• NaOH在位清洗再生，无需剥镍

• 高特异性结合His标签

• 操作便捷，无需离心/重力柱

• 兼容高通量自动化纯化

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