磁珠的参数和指标见Table 1，产品规格见 Table 2。

Table 1：重组蛋白 L磁珠参数和性能指标

Table 2：产品规格

注意：重组蛋白 L磁珠，2-8℃ 保存，不要冷冻，禁止磁珠在储存和使用过程中变干。

使用须知

本产品须与磁性分离器配套使用

磁珠使用前要混合震荡均匀

磁珠预处理要充分

孵育时要保持磁珠处于悬浮状态，以保持最大结合效率

在使用及保存磁珠过程中，禁止磁珠长时间干燥

禁止冷冻，离心磁珠，防止对磁珠产生不可逆的损伤

建议磁珠仅重复纯化同种蛋白

应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗

用后及时再生，避免将磁珠长时间置于低pH的缓冲液中，避免磁珠长菌

应用场景

知禾泰克重组蛋白 L磁珠专为高通量抗体纯化开发，应用场景包括重组抗体培养基条件优化筛选，重组抗体表达条件的优化筛选，杂交瘤抗体筛选，腹水抗体纯化，重组抗体活性评价和稳定细胞株筛选等。

使用方法

实验前准备

推荐缓冲液:

操作步骤

以纯化人血清为例，具体操作如下：

样品处理

取人血清100μL (一般血清样品中抗体含量约2-8mg/mL)至1.5mL 离心管中，加入900μL Binding/Washing buffer，充分混匀。

磁珠预处理

1）充分混匀磁珠后，取200μL 磁珠悬液到2mL 离心管中，磁性分离，弃上清；

2）加入1mL Binding/Washing Buffer 于离心管中，反复颠倒3-5 次使磁珠充分重悬，磁性分离，弃上清；该步骤重复一次。

注：磁珠的用量可根据磁珠对目标抗体的最大结合量进行调节，可根据磁珠的抗体结合能力计算磁珠的大概用量，建议磁珠用量应为目标抗体含量的1.2-1.5 倍。

结合

在处理好的磁珠管中加入步骤4.1 处理的样品溶液，振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手动轻轻翻转，使样品和磁珠充分接触混合结合15mins，进行磁性分离，弃上清。

漂洗

加入1mL 的Binding/Washing Buffer 于离心管中，反复颠倒3-5 次使磁珠充分重悬，磁性分离，弃上清；再重复该步骤2 次。

洗脱

1) 加入0.5-1mL Elution Buffer，室温下置于翻转混合仪或者手动轻轻翻转10mins，置于磁力架上进行磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标抗体；

2) 若需要，可重复上述步骤，收集洗脱液至新离心管中，以检测目标抗体是否完全洗脱（Elution Buffer 用量建议最终洗脱抗体浓度在0.5-1.2mg/mL，以确保一次洗脱可将95%以上的目标抗体被洗脱下来，用量过少会导致洗脱后仍有部分抗体残留于磁珠上）。

中和

在以上含抗体的洗脱液中加入1/10 抗体洗脱体积的Neutrilization buffer，混匀使其pH值保持在中性环境下，以维持抗体的生物活性，避免失活。

磁珠后处理

1) 向装有磁珠的离心管中加入1mL Elution Buffer，涡旋震荡5s，磁性分离弃上清。重复操作2 次；

2) 加入1mL Binding/Washing buffer，涡旋5s，磁性分离弃上清；重复操作2 次；

3) 加入Storage buffer 重悬磁珠，置于2-8℃保存。

磁珠再生

磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上，为了保证磁珠的使用效率，建议持续使用5 次后进行磁珠再生处理。

1) 约每1 mL（10mg/mL）磁珠加入1 mL（1%，v/v）Triron X-100 磁珠再生缓冲液，振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手动翻转混合10 mins 后进行磁性分离，弃上清；

2) 加入1 mL Binding/Washing buffer 进行重悬，磁性分离，弃上清，重复该操作3 次；

3) 加入1 mL Storage buffer 重悬磁珠，置于2-8℃保存。

流程优化

磁珠与抗体的的结合效率与抗体的种属来源及所属亚型有关，请确认抗体的类型与Protein L 配基的亲和效率（附表）：

1．抗体所属亚型与Protein L 的亲和度较低：a. 增加抗体与磁珠的孵育时间（30-120mins）；b. 提高结合缓冲液的pH 值（8-9）；c. 降低离子强度（25-100 mM NaCl）等方法提高亲和效率；d. 选择与目标抗体具有更高亲和度的配基（如Protein G 或Protein A）。

2．抗体与Protein L 配基亲和度太高导致抗体洗脱效率低：a．降低洗脱缓冲液的pH 值1.9-2.5；b．增大洗脱缓冲液的离子强度（可选用2-3 M MgCl2）；c．延长洗脱时间，提高洗脱效率。

附表