背景信息
重组蛋白 L磁珠（Recombinant Protein L Magnetic Beads），由NHS 活化的超顺磁性微球与Protein L共价结合形成的复合微粒，该产品具有较高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，洗脱条件均一，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体；尤其适用于同时纯化多个样品，样本和磁珠的体积范围也可灵活的调整，纯化的过程能够简便的放大，配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
技术指标
磁珠的参数和指标见Table 1，产品规格见 Table 2。
Table 1：重组蛋白 L磁珠参数和性能指标
基质 | 琼脂糖 |
配基 | Protein L |
粒径 | 0-37μm |
抗体结合能力 | ≥30mg IgG/mL（磁珠纯体积） |
磁珠浓度 | 20%（v/v） |
储存温度 | 2-8℃ |
保质期 | 2年 |
Table 2：产品规格
产品名称 | 货号 | 磁珠浓度 | 规格 |
重组蛋白 L磁珠 | MG601 | 20% v/v磁珠 | 5ml |
MG602 | 20% v/v磁珠 | 50ml |
注意：重组蛋白 L磁珠，2-8℃ 保存，不要冷冻，禁止磁珠在储存和使用过程中变干。
使用须知
使用方法
实验前准备
推荐缓冲液:
Binding/ Wash Buffer | PBST（137mM NaCl，2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 2.0mM KH2PO4,0.1% Tween-20），pH 7.2-7.4 |
Elution Buffer | 100mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.5 |
Neutrilization buffer | 1.0M Tris-HCl, pH 9.0 |
Storage buffer | PBST（含0.05% NaN3） |
操作步骤
以纯化人血清为例，具体操作如下：
样品处理
取人血清100μL (一般血清样品中抗体含量约2-8mg/mL)至1.5mL 离心管中，加入900μL Binding/Washing buffer，充分混匀。
磁珠预处理
1）充分混匀磁珠后，取200μL 磁珠悬液到2mL 离心管中，磁性分离，弃上清；
2）加入1mL Binding/Washing Buffer 于离心管中，反复颠倒3-5 次使磁珠充分重悬，磁性分离，弃上清；该步骤重复一次。
注：磁珠的用量可根据磁珠对目标抗体的最大结合量进行调节，可根据磁珠的抗体结合能力计算磁珠的大概用量，建议磁珠用量应为目标抗体含量的1.2-1.5 倍。
结合
在处理好的磁珠管中加入步骤4.1 处理的样品溶液，振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手动轻轻翻转，使样品和磁珠充分接触混合结合15mins，进行磁性分离，弃上清。
漂洗
加入1mL 的Binding/Washing Buffer 于离心管中，反复颠倒3-5 次使磁珠充分重悬，磁性分离，弃上清；再重复该步骤2 次。
洗脱
1) 加入0.5-1mL Elution Buffer，室温下置于翻转混合仪或者手动轻轻翻转10mins，置于磁力架上进行磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标抗体；
2) 若需要，可重复上述步骤，收集洗脱液至新离心管中，以检测目标抗体是否完全洗脱（Elution Buffer 用量建议最终洗脱抗体浓度在0.5-1.2mg/mL，以确保一次洗脱可将95%以上的目标抗体被洗脱下来，用量过少会导致洗脱后仍有部分抗体残留于磁珠上）。
中和
在以上含抗体的洗脱液中加入1/10 抗体洗脱体积的Neutrilization buffer，混匀使其pH值保持在中性环境下，以维持抗体的生物活性，避免失活。
磁珠后处理
1) 向装有磁珠的离心管中加入1mL Elution Buffer，涡旋震荡5s，磁性分离弃上清。重复操作2 次；
2) 加入1mL Binding/Washing buffer，涡旋5s，磁性分离弃上清；重复操作2 次；
3) 加入Storage buffer 重悬磁珠，置于2-8℃保存。
磁珠再生
磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上，为了保证磁珠的使用效率，建议持续使用5 次后进行磁珠再生处理。
1) 约每1 mL（10mg/mL）磁珠加入1 mL（1%，v/v）Triron X-100 磁珠再生缓冲液，振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手动翻转混合10 mins 后进行磁性分离，弃上清；
2) 加入1 mL Binding/Washing buffer 进行重悬，磁性分离，弃上清，重复该操作3 次；
3) 加入1 mL Storage buffer 重悬磁珠，置于2-8℃保存。
流程优化
磁珠与抗体的的结合效率与抗体的种属来源及所属亚型有关，请确认抗体的类型与Protein L 配基的亲和效率（附表）：
1．抗体所属亚型与Protein L 的亲和度较低：a. 增加抗体与磁珠的孵育时间（30-120mins）；b. 提高结合缓冲液的pH 值（8-9）；c. 降低离子强度（25-100 mM NaCl）等方法提高亲和效率；d. 选择与目标抗体具有更高亲和度的配基（如Protein G 或Protein A）。
2．抗体与Protein L 配基亲和度太高导致抗体洗脱效率低：a．降低洗脱缓冲液的pH 值1.9-2.5；b．增大洗脱缓冲液的离子强度（可选用2-3 M MgCl2）；c．延长洗脱时间，提高洗脱效率。
附表
Ig origin | Affinity for Protein L |
Human IgG | +++ |
Human IgG1,2,4 | ++++ |
Human IgG3 | +++ |
Human IgM | +++ |
Goat IgG1 ,2 | - |
Sheep IgG | - |
Sheep IgG1,2 | - |
Rat IgG | +++ |
运输与储存
冰袋运输。
产品应于 2–8℃ 条件下避光、密闭保存。不可冷冻，冷冻将导致磁珠聚集、性能下降。使用前充分混匀至均一状态。
应用领域
重组蛋白L（Protein L）源于Peptostreptococcus magnus表面蛋白，重组表达去除动物源成分。蛋白L特异性识别免疫球蛋白κ轻链可变区（Vκ），可结合含κ轻链的所有抗体类及亚类（IgG、IgM、IgA、IgE、IgD），不依赖重链Fc区，结合谱较蛋白A及蛋白G更宽。
广泛应用于：
蛋白L与κ轻链结合不干扰抗体Fab的抗原识别功能域，适合在接近生理条件（中性pH）下进行结合与洗脱，洗脱液（如0.1 M甘氨酸，pH 2.5–3.0）回收后应立即中和。与蛋白A/G磁珠互补，蛋白L在无Fc抗体片段纯化场景不可替代。
产品优势
特异性结合κ轻链，不受Fc限制
适用抗体片段（scFv、Fab、VHH等）
操作便捷，无需离心/重力柱
兼容高通量自动化纯化
非特异性吸附本底低
