背景信息
Strep Tactin磁珠（Strep Tactin Magnetic Beads），是由NHS 活化的琼脂糖磁珠偶联Strep-Tactin 制备形成的复合微粒，该产品能够快速分离纯化Strep-tag II 标签蛋白，Strep-Tactin 与链霉亲和素相比，对Strep-Tag II 的亲和能力更强大，且分离纯化条件温和，在生理条件下即可洗脱。Strep-Tag II 与其它标签相比，分子量更小，仅为1kDa 左右，对融合后的蛋白质结构和功能影响更小，能够有效保留蛋白质的活性，一步提取即可获得纯度更高的蛋白。配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
技术指标
磁珠的参数和指标见Table 1，产品规格见 Table 2。
Table 1：Strep Tactin磁珠参数和性能指标
基质 | 琼脂糖 |
粒径 | 10-37μm |
载量 | ≥7mg/mL（磁珠纯体积） |
磁珠浓度 | 20%（v/v） |
储存温度 | 2-8℃ |
保存液 | 1×PBS，含0. 02%Tween-20，0.05%Proclin300 |
保质期 | 2年 |
Table 2：产品规格
产品名称 | 货号 | 磁珠浓度 | 规格 |
Strep Tactin磁珠 | MG801 | 20% v/v磁珠 | 5ml |
MG802 | 20% v/v磁珠 | 50ml |
注意：Strep Tactin磁珠，2-8℃ 保存，不要冷冻，禁止磁珠在储存和使用过程中变干。
使用须知
本产品须与磁性分离器配套使用
磁珠使用前要混合震荡均匀
磁珠预处理要充分
孵育时要保持磁珠处于悬浮状态，以保持最大结合效率
在使用及保存磁珠过程中，禁止磁珠长时间干燥
禁止冷冻，离心磁珠，防止对磁珠产生不可逆的损伤
建议磁珠仅重复纯化同种蛋白
应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗
用后及时再生，避免将磁珠长时间置于低pH的缓冲液中，避免磁珠长菌
使用方法
实验前准备
推荐缓冲液:
Binding/ Wash Buffer | 10mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, pH 8.0 |
Elution Buffer | 50mM d-Biotin in Binding Buffer |
Regeneration Buffer | 0.5M NaOH or 1mM HABA in Binding Buffer |
操作步骤
样品处理
本操作说明书提供以下常见样品处理方法：
1) 菌体内表达蛋白：菌体用适量的Binding Buffer 稀释，如实验需要，可加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1mM PMSF)，重悬菌体，冰浴超声裂解菌体，即为粗蛋白样品。
2) 胞外表达蛋白：离心取上清液加入等量Binding Buffer 稀释，即为粗蛋白样品。
3) 动物细胞胞内表达蛋白：收集细胞PBS 洗涤1 次后弃上清；接着用适量含1%(v/v)Triton X-100 或1% (v/v) NP-40 的Binding Buffer 重悬，加入蛋白酶抑制剂(如1mM 的PMSF)，冰浴10mins，即为粗蛋白样品。
磁珠预处理
一般情况下，磁珠的使用量是由使用者根据目标蛋白产量和磁珠载量信息计算获得。
1) 充分涡旋混匀后，立即取适量磁珠悬液于离心管中，然后将离心管置于磁分离器上，澄清后吸弃上清液。
2) 加入等体积的Binding Buffer，取下离心管后涡旋混匀10s，后置于磁分离器上，澄清后吸弃上清液，重复此操作1 次。
结合
1) 将5-10mL 粗蛋白样品转移到装有已预处理磁珠的离心管中，盖紧离心管盖；
2) 将离心管涡旋震荡15s 后将其置于旋转混合仪上，旋转混合30mins 或2-8℃混合1h；
3) 混合结束后，将其置于磁力架上，颠倒混合数次，润洗管壁和管盖上的磁珠，上清澄清后移去上清液到新的离心管中以备后续检测。
漂洗
向上述磁珠中加入5~10 mL Washing Buffer，漩涡混合2mins，磁性分离，移出清洗液到新的离心管中，以备取样检测；重复操作该步骤。
洗脱
向磁珠管中加入2~5 mL Elution Buffer（用户可根据目标蛋白浓度需求改变洗脱体积）于离心管中，盖紧离心管盖，然后将离心管置于垂直混合仪上，室温垂直混合洗脱10mins；磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标蛋白样品；
注：若需要可重复上述步骤1 次，收集样品到新离心管以检测蛋白是否洗脱完全。
磁珠保存和再生
NaOH 再生：洗脱后的磁珠按照以下顺序进行洗涤，5~10mL 纯化水洗涤3 次、5~10mL 0.5M NaOH 洗涤3 次、纯水洗涤至中性，加入10mL 保存液，置于2~8℃保存。
HABA 再生：用脱硫生物素洗脱目标蛋白的磁珠还可以用HABA 缓冲液再生，加入5~10mL 1mM HABA 洗涤磁珠5 次，接着用Binding Buffer 洗涤磁珠至磁珠本身颜色，每次洗涤5mins，最后加入10mL 保存液，将磁珠放置2~8°C 保存。
流程优化
以上操作流程适用于大部分Strep-Tag II 标签蛋白的纯化， 根据目标蛋白与Strep-Tactin 蛋白纯化磁珠的结合性能不同，用户可以从以下几个方面对纯化流程进行优化，以提高目标蛋白的回收率和纯度。
1）提高目标蛋白回收率的参考方法：a．延长蛋白溶液与磁珠孵育的时间；b．添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；c．增加磁珠用量；d．延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数。
2）提高目标蛋白纯度的参考方法：a．在纯化过程中添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；b．延长洗涤的时间，增加洗涤次数。
运输与储存
冰袋运输。
产品应于 2–8℃ 条件下避光、密闭保存。不可冷冻，冷冻将导致磁珠聚集、性能下降。使用前充分混匀至均一状态。
应用领域
Strep-Tactin是链霉亲和素（Streptavidin）的工程化变体，对Strep-tag II（WSHPQFEK）八肽标签具有高亲和力（Kd ~1 μM），通过生物素竞争可实现温和洗脱。与His标签/Ni-NTA纯化体系相比，Strep-tag II 体系的优势在于：生理条件洗脱无需咪唑或低pH，保护蛋白天然构象；极低非特异性背景，尤其适用于低表达量蛋白或复杂样品；Strep-tag II 分子量小（~1 kDa），一般不干扰蛋白功能。
广泛应用于：
Strep-tag II融合蛋白纯化
免疫沉淀（IP）与免疫共沉淀（Co-IP）
蛋白-蛋白相互作用分析（pull-down）
蛋白复合物结构生物学研究
酶与底物相互作用分析
生物化学与结构生物学
基因治疗载体蛋白纯化
Strep-Tactin磁珠体系生理条件洗脱的特点，使其在结构生物学（X射线晶体学、冷冻电镜）及蛋白复合物研究中尤为适用——目标蛋白无需经历低pH或高浓度咪唑处理，可最大程度保持天然构象与结合活性。
产品优势
