Ni NTA Magnetic Beads 琼脂糖磁珠是一种用于纯化带有组氨酸(His)标签蛋白的新工具, 其具有超顺磁性,可通过外加磁场实现快速的分离与回收。本产品的活性基团为螯合有 Ni2+ 的亚硝基三乙酸。 与传统的 Ni-NTA 介质相比,Ni NTA Magnetic Beads 有以下优势:
操作简单且快速,无需对样品进行澄清处理,可以直接从复杂样本中捕获带有组氨酸标签的目标蛋白,极大的简化了纯化工艺;提高了纯化效率,高纯度、高收率;易于平行重复,易于放大。
产品介绍
Table 1:NI NTA Magnetic Beads 参数和性能指标
基质 | 高交联琼脂糖、四氧化三铁纳米颗粒 |
螯合金属离子 | Ni2+ |
金属离子密度 | ≥20 μmol/mL 磁珠(100%) |
磁珠浓度 | 10% (v / v) |
粒径分布 | 40-100 μm |
载量 | ≥40 mg/mL 磁珠(100%) |
化学稳定性 | 常规水相缓冲液,8 M 尿素,6 M 盐酸胍,1 M 氢氧化钠 |
储存条件 | 20%乙醇,2-8℃ |
Table 2:试剂和规格
产品名称 | 试剂名称 | 规格 | 数量 | 保存条件 |
Ni NTA Magnetic Beads | 10% v/v磁珠 | 10ml | 1 | 2-8℃ |
10% v/v磁珠 | 50ml | 1 | 2-8℃ |
使用须知
本产品须与磁性分离设备配套使用
磁珠使用前要混合震荡均匀
磁珠预处理要充分
孵育时要保持磁珠处于悬浮状态,以保持最大结合效率
在使用及保存磁珠过程中,禁止磁珠长时间干燥
禁止冷冻,离心磁珠,防止对磁珠产生不可逆的损伤
建议磁珠仅重复纯化同种蛋白,当纯化性能降低时,可进行再生处理
应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗
使用方法
1. 常用缓冲液
| Binding Buffer | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 20 mM Imidazole, pH8.0 |
| Wash Buffer | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 50 mM Imidazole, pH8.0 |
| Elution Buffer-1 | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 250 mM Imidazole, pH8.0 |
| Elution Buffer-2 | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 500 mM Imidazole, pH8.0 |
| Storage Buffer | 20% (v/v) Ethanol |
缓冲液的配制影响目的蛋白的回收率和纯度,在纯化较大规模蛋白之前,需做好预实验,筛选出适用于目的蛋白的缓冲液体系。
在结合缓冲液中添加少量咪唑可以减少杂蛋白的吸附;洗脱时,不确定最佳洗脱咪唑浓度的情况下,推荐使用不同梯度洗脱,并收集上清液做 SDS-PAGE 电泳验证,确定合适的洗脱浓度。
2. 手动纯化流程
2.1 样品制备
细胞分泌表达的样品直接用Binding Buffer稀释2-3倍,混合均匀备用;
细胞胞内表达的样品,用 Binding Buffer 重悬,按需加入蛋白酶抑制剂(例如:终浓度为 1 mM的 PMSF),搅拌混合均匀,冰浴超声裂解细胞备用。
2.2 磁珠预处理
取一定量磁珠至 EP 管中,置于磁力架上,使磁珠沉降,移除上层的 Storage Buffer,用与Storage Buffer等体积的 Binding Buffer (例如取400ul 10% V/V的磁珠,磁珠体积是40ul, Storage Solution的体积是360ul,这里加入360ul)洗涤 2-3 次,磁性分离后加Binding Buffer调整磁珠体积比为10%,保留磁珠备用。
2.3 结合
将磁珠加入步骤 2.1 的样品中,在室温下使用混合仪或摇床翻转 EP 管,使磁珠充分的分散在样品溶液中,约30 min 后进行磁性分离,移出上清液,留样检测或废弃(对于部分易降解的蛋白,建议在 2~8℃下孵育 1 h 以上)。
2.4 漂洗
在上一步 EP 管中加入与Storage Buffer等体积的 Wash Buffer,翻转重悬磁珠后进行磁性分离,移出上清液,留样检测或废弃,可根据需要配制不同咪唑浓度的漂洗液分步漂洗。
2.5 洗脱
将与Storage Buffer等体积的 Elution Buffer 加入上一步的 EP 管中,在室温下使用垂直混合仪或手动轻柔翻转 EP 管,使磁珠充分的分散,10 min 后进行磁性分离,移取上清液至新 EP 管,可根据需要配制不同咪唑浓度的漂洗液分步漂洗。
注:建议用户在第一次洗脱后再重复洗脱 1-2 次,确保目的蛋白充分回收;微球上 90%结合的目的蛋白在第一次洗脱时会被洗脱,因此,之后的洗脱时间及洗脱液体积均可自定义,翻转混合均匀后磁性分离即可。
2.6 磁珠后处理
使用后的磁珠用 Elution Buffer 洗涤 2 次,磁性分离后移除上清液;之后用去离子水洗
涤 2 次,磁性分离后移除上清液;加入 Storage Solution 使磁珠浓度为 10%(v/v),置于 2-8℃保存。
3. 磁珠再生
Ni NTA Magnetic Beads 琼脂糖磁珠在连续使用 8~10 次后,若出现载量明显下降的现象时,表明螯合的 Ni2+有部分脱落,建议进行再生处理,需准备以下缓冲液。
Stripping Buffer | 20 mM Phosphate Buffer,500 mM NaCl,100 mM EDTA,pH7.4 |
Beads Washing Buffer | 0.5 M NaOH,2 M NaCl |
Recharge Buffer | 100 mM NiSO4 |
具体操作流程如下:
(1)取结合性能降低的磁珠至EP 管中,磁性分离移除上清液,加入3倍磁珠体积的 Stripping Buffer,重悬磁珠,在 37℃摇床内震荡混合 30 min,磁性分离,去除上清液,重复 1 次;
(2)加入3倍磁珠体积的去离子水,手动翻转 EP 管使磁珠重悬,磁性分离后移除上清液,重复 2 次;
(3)加入3倍磁珠体积的 Beads Washing Buffer,在室温下使用垂直混合仪或手动轻柔翻转 EP 管,使磁珠重悬,5 min 后磁性分离移除上清液;加入3倍磁珠体积的去离子水,手动翻转 EP 管使磁珠重悬,磁性分离后移除上清液,重复 3~5 次,至洗涤液呈中性为止;
(4)加入3倍磁珠体积的 Recharge Buffer,在室温下使用垂直混合仪或手动轻柔翻转EP 管,使磁珠重悬,5 min 后磁性分离移除上清液,重复 2 次;用去离子水洗涤磁珠 5 次以上,确保游离的 Ni2+去除完全;
(5)加入 Storage Solution 使磁珠浓度为 10%(v/v),置于 2-8℃保存。
订购信息
产品名称 | 规格 | 货号 |
rProtein A Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG101 |
rProtein A Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG102 |
rProtein G Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG201 |
rProtein G Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG202 |
Ni NTA Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG301 |
Ni NTA Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG302 |
Ni TED Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG401 |
Ni TED Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG402 |




MG1101 MG1102 抗 Myc (Anti-c-Myc)磁珠
抗 Myc 磁珠(Anti c-Myc Magnetic Beads),由高质量的鼠源IgG 单抗与磁珠共价偶联制备,具有较高的c-Myc 标签融合蛋白载量,另外本产品还具有快速的磁响应性、良好的分散性、极低的非特异结合等特点,可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中HA 标记蛋白的纯化及免疫沉淀等。
MG1001 MG1002 抗HA磁珠(anti-HA Magnetic Beads)
抗HA磁珠(anti-HA Magnetic Beads),由高质量的鼠源IgG 单抗与磁珠共价偶联制备,具有较高的HA 标签融合蛋白载量,另外本产品还具有快速的磁响应性、良好的分散性、极低的非特异结合等特点,可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中HA 标记蛋白的纯化及免疫沉淀等。
MG901 MG902 肝素磁珠(Heparin Magnetic Beads)
肝素磁珠(Heparin Magnetic Beads),表面偶联的肝素带有负电性硫酸根离子基团,可以与带正电的蛋白结合,也可与生长因子及抗凝血酶AT Ⅲ结合,可以快速高效地从血浆中一步捕获到目的蛋白,然后通过磁性分离实现纯化目标蛋白的目的。样本和磁珠的体积范围也可灵活的调整,纯化的过程能够简便的放大。配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
MG801 MG802 Strep Tactin磁珠(Strep Tactin Magnetic Beads)
Strep Tactin磁珠(Strep Tactin Magnetic Beads),是由NHS 活化的琼脂糖磁珠偶联Strep-Tactin 制备形成的复合微粒,该产品能够快速分离纯化Strep-tag II 标签蛋白,Strep-Tactin 与链霉亲和素相比,对Strep-Tag II 的亲和能力更强大,且分离纯化条件温和,在生理条件下即可洗脱。Strep-Tag II 与其它标签相比,分子量更小,仅为1kDa 左右,对融合后的蛋白质结构和功能影响更小,能够有效保留蛋白质的活性,一步提取即可获得纯度更高的蛋白。配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
MG701 MG702GSH磁珠(GSH Magnetic Beads)
GSH磁珠(GSH Magnetic Beads),是由长臂环氧基活化的顺磁性琼脂糖微球与还原性谷胱甘肽共价偶联形成的复合微粒,其配体能够特异性的结合谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白,该产品可通过磁性设备一步式快速获得GST 标签蛋白。尤其适用于同时纯化多个
样品,样本和磁珠的体积范围也可灵活的调整,纯化的过程能够简便的放大,配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
重组蛋白 L磁珠(Recombinant Protein L Magnetic Beads),由NHS 活化的超顺磁性微球与Protein L共价结合形成的复合微粒,该产品具有较高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,洗脱条件均一,一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体;尤其适用于同时纯化多个样品,样本和磁珠的体积范围也可灵活的调整,纯化的过程能够简便的放大,配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
MG501 MG502重组耐碱蛋白A磁珠 (ATPA Magnetic Beads)
耐碱蛋白A磁珠(ATPA Magnetic Beads) 本产品将重组耐碱蛋白A (Recombinant Alkali-Tolerant Protein A)高密度环氧基偶联到磁性琼脂糖微球表面,具有高载量,高特异性,高回收率,低非特异吸附和强耐碱性的特性。可结合293/CHO细胞培养上清、杂交瘤细胞上清、小鼠腹水和血清等样本中的IgG或带有FC标签的重组蛋白。重组ATPA只保留了Protein A中抗体特异结合的部分结构域,与Protein A相比,对样品的纯化效果几乎不变,但对碱的耐受性大大提升,在重复使用时,极大地降低了样品交叉污染的风险。
重组蛋白G磁珠(rProtein G Magnetic Beads)本产品将重组Protein G高密度氨基偶联到磁性琼脂糖微球表面,具有高载量,高特异性,高回收率和低非特异吸附的特性。可结合293/CHO细胞培养上清、杂交瘤细胞上清、小鼠腹水和血清等样本中的IgG或带有FC标签的重组蛋白。重组Protein G只保留了C1,C2和C3三个抗体特异结合的结构域,降低了非特异性吸附,因此通过一步结合和洗脱即可得到纯度大于90%的目的蛋白。Protein G可用于纯化不能与Protein A很好结合的哺乳动物IgG。相对于Protein A,Protein G对于大多数哺乳动物的IgG有着更高的亲和力,尤其是对于人 IgG3,小鼠IgG1和大鼠 IgG2a。
Protein A和Protein G与不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力不一样,具体可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别。
Ni TED Magnetic Beads 琼脂糖磁珠是一种用于纯化带有组氨酸(His)标签蛋白的新工具, 其具有超顺磁性,可通过外加磁场实现快速的分离与回收。本产品的活性基团为螯合有 Ni2+ 的TED,由于TED对镍离子超强的螯合能力,使亲和Ni-TED能够耐受高浓度的螯合剂EDTA 和还原剂DTT,适用于含有EDTA 或DTT等成分的组氨酸标记(His-Tag)的基因工程蛋白质以的分离纯化。与传统的 Ni-NTA 介质相比,Ni TED Magnetic Beads有以下优势:
操作简单且快速,无需对样品进行澄清处理,可以直接从复杂样本中捕获带有组氨酸标签的目标蛋白,极大的简化了纯化工艺和提高纯化效率
耐受EDTA或DTT等成分,适用于真核表达样品的直接纯化
耐受NaOH,无需脱镍即可清洗,大大缩短了磁珠再生时间
高纯度、高收率
易于平行重复
易于放大
CRO热线:13031023698
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邮箱:support@sciprotech.comCRO热线:13031023698
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