Strep Tactin磁珠(Strep Tactin Magnetic Beads),是由NHS 活化的琼脂糖磁珠偶联Strep-Tactin 制备形成的复合微粒,该产品能够快速分离纯化Strep-tag II 标签蛋白,Strep-Tactin 与链霉亲和素相比,对Strep-Tag II 的亲和能力更强大,且分离纯化条件温和,在生理条件下即可洗脱。Strep-Tag II 与其它标签相比,分子量更小,仅为1kDa 左右,对融合后的蛋白质结构和功能影响更小,能够有效保留蛋白质的活性,一步提取即可获得纯度更高的蛋白。配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
磁珠的参数和指标见Table 1,产品规格见 Table 2。
Table 1:Strep Tactin磁珠参数和性能指标
基质 | 琼脂糖 |
粒径 | 10-37μm |
载量 | ≥7mg/mL(磁珠纯体积) |
磁珠浓度 | 20%(v/v) |
储存温度 | 2-8℃ |
保存液 | 1×PBS,含0. 02%Tween-20,0.05%Proclin300 |
保质期 | 2年 |
Table 2:产品规格
产品名称 | 货号 | 磁珠浓度 | 规格 |
Strep Tactin磁珠 | MG801 | 20% v/v磁珠 | 5ml |
MG802 | 20% v/v磁珠 | 50ml |
注意:Strep Tactin磁珠,2-8℃ 保存,不要冷冻,禁止磁珠在储存和使用过程中变干。
本产品须与磁性分离器配套使用
磁珠使用前要混合震荡均匀
磁珠预处理要充分
孵育时要保持磁珠处于悬浮状态,以保持最大结合效率
在使用及保存磁珠过程中,禁止磁珠长时间干燥
禁止冷冻,离心磁珠,防止对磁珠产生不可逆的损伤
建议磁珠仅重复纯化同种蛋白
应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗
用后及时再生,避免将磁珠长时间置于低pH的缓冲液中,避免磁珠长菌
适用于Strep-Tag融合蛋白的纯化,配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
推荐缓冲液:
Binding/ Wash Buffer | 10mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, pH 8.0 |
Elution Buffer | 50mM d-Biotin in Binding Buffer |
Regeneration Buffer | 0.5M NaOH or 1mM HABA in Binding Buffer |
本操作说明书提供以下常见样品处理方法:
1) 菌体内表达蛋白:菌体用适量的Binding Buffer 稀释,如实验需要,可加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1mM PMSF),重悬菌体,冰浴超声裂解菌体,即为粗蛋白样品。
2) 胞外表达蛋白:离心取上清液加入等量Binding Buffer 稀释,即为粗蛋白样品。
3) 动物细胞胞内表达蛋白:收集细胞PBS 洗涤1 次后弃上清;接着用适量含1%(v/v)Triton X-100 或1% (v/v) NP-40 的Binding Buffer 重悬,加入蛋白酶抑制剂(如1mM 的PMSF),冰浴10mins,即为粗蛋白样品。
一般情况下,磁珠的使用量是由使用者根据目标蛋白产量和磁珠载量信息计算获得。
1) 充分涡旋混匀后,立即取适量磁珠悬液于离心管中,然后将离心管置于磁分离器上,澄清后吸弃上清液。
2) 加入等体积的Binding Buffer,取下离心管后涡旋混匀10s,后置于磁分离器上,澄清后吸弃上清液,重复此操作1 次。
1) 将5-10mL 粗蛋白样品转移到装有已预处理磁珠的离心管中,盖紧离心管盖;
2) 将离心管涡旋震荡15s 后将其置于旋转混合仪上,旋转混合30mins 或2-8℃混合1h;
3) 混合结束后,将其置于磁力架上,颠倒混合数次,润洗管壁和管盖上的磁珠,上清澄清后移去上清液到新的离心管中以备后续检测。
向上述磁珠中加入5~10 mL Washing Buffer,漩涡混合2mins,磁性分离,移出清洗液到新的离心管中,以备取样检测;重复操作该步骤。
向磁珠管中加入2~5 mL Elution Buffer(用户可根据目标蛋白浓度需求改变洗脱体积)于离心管中,盖紧离心管盖,然后将离心管置于垂直混合仪上,室温垂直混合洗脱10mins;磁性分离,收集洗脱液到新的离心管中,即为纯化的目标蛋白样品;
注:若需要可重复上述步骤1 次,收集样品到新离心管以检测蛋白是否洗脱完全。
NaOH 再生:洗脱后的磁珠按照以下顺序进行洗涤,5~10mL 纯化水洗涤3 次、5~10mL 0.5M NaOH 洗涤3 次、纯水洗涤至中性,加入10mL 保存液,置于2~8℃保存。
HABA 再生:用脱硫生物素洗脱目标蛋白的磁珠还可以用HABA 缓冲液再生,加入5~10mL 1mM HABA 洗涤磁珠5 次,接着用Binding Buffer 洗涤磁珠至磁珠本身颜色,每
次洗涤5mins,最后加入10mL 保存液,将磁珠放置2~8°C 保存。
以上操作流程适用于大部分Strep-Tag II 标签蛋白的纯化, 根据目标蛋白与Strep-Tactin 蛋白纯化磁珠的结合性能不同,用户可以从以下几个方面对纯化流程进行优化,以提高目标蛋白的回收率和纯度。
1)提高目标蛋白回收率的参考方法:a.延长蛋白溶液与磁珠孵育的时间;b.添加合适的蛋白酶抑制剂,防止目标蛋白降解;c.增加磁珠用量;d.延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数。
2)提高目标蛋白纯度的参考方法:a.在纯化过程中添加合适的蛋白酶抑制剂,防止目标蛋白降解;b.延长洗涤的时间,增加洗涤次数。




MG1101 MG1102 抗 Myc (Anti-c-Myc)磁珠
抗 Myc 磁珠(Anti c-Myc Magnetic Beads),由高质量的鼠源IgG 单抗与磁珠共价偶联制备,具有较高的c-Myc 标签融合蛋白载量,另外本产品还具有快速的磁响应性、良好的分散性、极低的非特异结合等特点,可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中HA 标记蛋白的纯化及免疫沉淀等。
MG1001 MG1002 抗HA磁珠(anti-HA Magnetic Beads)
抗HA磁珠(anti-HA Magnetic Beads),由高质量的鼠源IgG 单抗与磁珠共价偶联制备,具有较高的HA 标签融合蛋白载量,另外本产品还具有快速的磁响应性、良好的分散性、极低的非特异结合等特点,可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中HA 标记蛋白的纯化及免疫沉淀等。
MG901 MG902 肝素磁珠(Heparin Magnetic Beads)
肝素磁珠(Heparin Magnetic Beads),表面偶联的肝素带有负电性硫酸根离子基团,可以与带正电的蛋白结合,也可与生长因子及抗凝血酶AT Ⅲ结合,可以快速高效地从血浆中一步捕获到目的蛋白,然后通过磁性分离实现纯化目标蛋白的目的。样本和磁珠的体积范围也可灵活的调整,纯化的过程能够简便的放大。配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
MG701 MG702GSH磁珠(GSH Magnetic Beads)
GSH磁珠(GSH Magnetic Beads),是由长臂环氧基活化的顺磁性琼脂糖微球与还原性谷胱甘肽共价偶联形成的复合微粒,其配体能够特异性的结合谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白,该产品可通过磁性设备一步式快速获得GST 标签蛋白。尤其适用于同时纯化多个
样品,样本和磁珠的体积范围也可灵活的调整,纯化的过程能够简便的放大,配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
重组蛋白 L磁珠(Recombinant Protein L Magnetic Beads),由NHS 活化的超顺磁性微球与Protein L共价结合形成的复合微粒,该产品具有较高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,洗脱条件均一,一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体;尤其适用于同时纯化多个样品,样本和磁珠的体积范围也可灵活的调整,纯化的过程能够简便的放大,配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。
MG501 MG502重组耐碱蛋白A磁珠 (ATPA Magnetic Beads)
耐碱蛋白A磁珠(ATPA Magnetic Beads) 本产品将重组耐碱蛋白A (Recombinant Alkali-Tolerant Protein A)高密度环氧基偶联到磁性琼脂糖微球表面,具有高载量,高特异性,高回收率,低非特异吸附和强耐碱性的特性。可结合293/CHO细胞培养上清、杂交瘤细胞上清、小鼠腹水和血清等样本中的IgG或带有FC标签的重组蛋白。重组ATPA只保留了Protein A中抗体特异结合的部分结构域,与Protein A相比,对样品的纯化效果几乎不变,但对碱的耐受性大大提升,在重复使用时,极大地降低了样品交叉污染的风险。
重组蛋白G磁珠(rProtein G Magnetic Beads)本产品将重组Protein G高密度氨基偶联到磁性琼脂糖微球表面,具有高载量,高特异性,高回收率和低非特异吸附的特性。可结合293/CHO细胞培养上清、杂交瘤细胞上清、小鼠腹水和血清等样本中的IgG或带有FC标签的重组蛋白。重组Protein G只保留了C1,C2和C3三个抗体特异结合的结构域,降低了非特异性吸附,因此通过一步结合和洗脱即可得到纯度大于90%的目的蛋白。Protein G可用于纯化不能与Protein A很好结合的哺乳动物IgG。相对于Protein A,Protein G对于大多数哺乳动物的IgG有着更高的亲和力,尤其是对于人 IgG3,小鼠IgG1和大鼠 IgG2a。
Protein A和Protein G与不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力不一样,具体可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别。
Ni NTA Magnetic Beads 琼脂糖磁珠是一种用于纯化带有组氨酸(His)标签蛋白的新工具, 其具有超顺磁性,可通过外加磁场实现快速的分离与回收。本产品的活性基团为螯合有 Ni2+ 的亚硝基三乙酸。 与传统的 Ni-NTA 介质相比,Ni NTA Magnetic Beads 有以下优势:
操作简单且快速,无需对样品进行澄清处理,可以直接从复杂样本中捕获带有组氨酸标签的目标蛋白,极大的简化了纯化工艺;提高了纯化效率,高纯度、高收率;易于平行重复,易于放大。
Ni TED Magnetic Beads 琼脂糖磁珠是一种用于纯化带有组氨酸(His)标签蛋白的新工具, 其具有超顺磁性,可通过外加磁场实现快速的分离与回收。本产品的活性基团为螯合有 Ni2+ 的TED,由于TED对镍离子超强的螯合能力,使亲和Ni-TED能够耐受高浓度的螯合剂EDTA 和还原剂DTT,适用于含有EDTA 或DTT等成分的组氨酸标记(His-Tag)的基因工程蛋白质以的分离纯化。与传统的 Ni-NTA 介质相比,Ni TED Magnetic Beads有以下优势:
操作简单且快速,无需对样品进行澄清处理,可以直接从复杂样本中捕获带有组氨酸标签的目标蛋白,极大的简化了纯化工艺和提高纯化效率
耐受EDTA或DTT等成分,适用于真核表达样品的直接纯化
耐受NaOH,无需脱镍即可清洗,大大缩短了磁珠再生时间
高纯度、高收率
易于平行重复
易于放大
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