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  • MG1001 MG1002 抗HA磁珠(anti-HA Magnetic Beads)
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  • MG1001 MG1002 抗HA磁珠(anti-HA Magnetic Beads)

    抗HA磁珠(anti-HA Magnetic Beads),由高质量的鼠源IgG 单抗与磁珠共价偶联制备,具有较高的HA 标签融合蛋白载量,另外本产品还具有快速的磁响应性、良好的分散性、极低的非特异结合等特点,可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中HA 标记蛋白的纯化及免疫沉淀等。

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商品参数
    产品简介

    抗HA磁珠(anti-HA Magnetic Beads),由高质量的鼠源IgG 单抗与磁珠共价偶联制备,具有较高的HA 标签融合蛋白载量,另外本产品还具有快速的磁响应性、良好的分散性、极低的非特异结合等特点,可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中HA 标记蛋白的纯化及免疫沉淀等。


    磁珠的参数和指标见Table 1,产品规格见 Table 2。

     

    Table 1:抗HA磁珠参数和性能指标


    基质

    琼脂糖

    粒径

    10-37μm

    载量

    ≥0.6mg/mL(磁珠纯体积)

    磁珠浓度

    20%(v/v)

    储存温度

    2-8℃

    保存液

    1xPBS,含0.03% NaN3

    保质期

    2年

     

    Table 2:产品规格


     

    产品名称

    货号

    磁珠浓度

    规格

    抗HA磁珠

    MG1001

    20% v/v磁珠

    5ml

    MG1002

    20% v/v磁珠

    50ml


    注意:抗HA磁珠,2-8℃ 保存,不要冷冻,禁止磁珠在储存和使用过程中变干。

     

    使用须知


    本产品须与磁性分离器配套使用

    磁珠使用前要混合震荡均匀

    磁珠预处理要充分

    孵育时要保持磁珠处于悬浮状态,以保持最大结合效率

    在使用及保存磁珠过程中,禁止磁珠长时间干燥

    禁止冷冻,离心磁珠,防止对磁珠产生不可逆的损伤

    建议磁珠仅重复纯化同种蛋白

    应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗

    使用本产品进行IP 实验前,需先确认样品中HA 融合蛋白的表达情况

    在进行细胞或菌体裂解时不要使用含DTT的裂解液,防止造成磁珠上Anti-HA 抗体脱落


    应用场景

    适用于HA-tag融合蛋白的纯化,配备磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自动化蛋白纯化工作站可同时处理1-96 个样本。

    使用方法

    实验前准备

    推荐缓冲液:

    Binding/ Wash Buffer

    TBST: 50mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 0.5%   Tween-20, pH7.4

    Elution Buffer A

    0.1M Glycine, pH 2.5

    Elution Buffer B

    2mg/mL HA peptide, 50mM Tris, 150mM NaCl,   pH 7.4

    Neutralization   Buffer

    1M Tris-HCl, pH 8.0

    操作步骤

    样品处理

    样品可以是细菌发酵液或者细胞裂解液,裂解完成后样品溶液中不能含有颗粒不溶物,可以用0.22μm 滤膜过滤或10,000×g 离心15mins。


    磁珠预处理

    充分混匀Anti-HA 磁珠,取10-25μL 磁珠悬液,置于1.5mL EP 管中,加入500μL

    结合/清洗缓冲液,充分混悬后置磁力架上磁性分离弃上清。重复该操作2 次。


    结合

    在清洗后的磁珠悬液中加入500μL 细胞裂解液,充分混悬,置于翻转混合仪孵育,室温孵育2 小时或者4°C 条件下孵育过夜。置于磁力架上磁性分离,弃上清。


    漂洗

    在上述分离得到的磁珠中加入1mL 洗涤缓冲液,充分混悬磁珠,磁性分离,弃上清。重复该操作3 次。


    洗脱

    根据下游用途,本说明提供三种洗脱方法:

    a. 变性洗脱法:

    如需直接检测目的蛋白,则在上述洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入50μL 1×SDS-PAGE 上样缓冲液,煮沸5mins,冷却至室温后进行磁性分离取上清进行SDS-PAGE 检测。

    b. 酸性洗脱法:

    向洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入50μL 的洗脱液A 混合均匀, 室温震荡混10mins。分离磁珠,收集上清至新EP 管,按洗脱液:中和液=5:1 的比例加入中和液,调节洗脱液pH 至中性。

    c. 竞争性洗脱法:

    向洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入50μL 的洗脱液A 混合均匀,室温孵育1 小时或者4°C 条件下孵育2-4h。分离磁珠,收集上清至新EP 管,即为目的蛋白。

    注:可重复洗脱步骤以获得更高的回收率

     

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