纳米抗体因其分子量小、免疫原性低、灵敏度高、特异性好及易于改造等优势，在治疗与临床诊断中具有重要潜力。目前，获取针对特定抗原的纳米抗体主要依赖文库筛选，根据构建方法可分为天然文库、免疫文库与合成文库三类。
1. 免疫纳米抗体文库
通过免疫动物（如羊驼、骆驼等）并提取其B淋巴细胞的VHH基因构建而成。该文库通常包含至少108个克隆，可筛选出nM至pM级高亲和力纳米抗体，且经体内亲和力成熟，抗体特异性和亲和力较高。但其构建需多次免疫，耗时较长，操作复杂。
2. 天然纳米抗体文库
来源于未经免疫的骆驼科动物B淋巴细胞，无需抗原免疫，无抗原偏好性，适用于免疫原性低、毒性或传染性强的抗原。但文库缺乏体内亲和力成熟，需构建大容量（＞10⁹ cfu/mL）与高多样性的基因库以提高筛选成功率。
3. 合成纳米抗体文库
完全通过人工设计FR与CDR序列构建，无需动物免疫，分为半合成与全合成两种。其优势在于操作简便、无动物伦理问题，并可通过理性设计提升稳定性、溶解性与多样性。常用支架如cAbBCII10，并采用NNK或者三联密码子Trimer phosphoramidites (Trimer codon)等技术引入CDR多样性，已成功应用于多种抗原的高亲和力纳米抗体筛选。
总结
三类文库各有适用场景：免疫文库适用于高免疫原性抗原，可获得高亲和力抗体；天然文库适用于不宜免疫的抗原；合成文库则具有设计灵活、周期短、可大规模生产等优势，是药物研发与诊断工具开发的重要平台。
