背景信息
蛋白酶K又称角蛋白酶，来源于消化毛发、角质的微生物。蛋白酶K是现有蛋白酶中活性较高的品种，pH活性范围为4-12，温度范围达4-85℃，活性在SDS、尿素或 EDTA存在的情况下不受影响，其作用原理是切割脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，可以降解所有蛋白质成为短肽和氨基酸，可以有效替代其它蛋白酶家族产品，譬如碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等品种，简化工业处理过程、降低生产成本。本产品来源于表达经过定点突变优化的林伯氏白色念球菌（Engyodontium album）蛋白酶K 基因的毕赤酵母，具有比活性高、产量高及更广的温度/pH值活性范围等优势。本产品高纯度，高活性，无动物源性污染。
产品用途
基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中用于去 除核酸酶和其它蛋白污染；
生物制药工业中提取核酸、多糖类药物等非蛋白类生物制品，例如DNA 疫苗和肝素的制备；
用于皮肤保健去除老化角质层细胞以及鞣皮、制备水解蛋白调味品、化妆品及饲料加工等日用工业领域。
技术指标
产品级别 | 分子生物级，非无菌粉 |
来源种属 | 表达经过基因工程改造的白色念珠菌（Engyodontium album）蛋白酶K基因的毕赤酵母 |
预测分子量 | 29.3 kDa |
标签 | C-His Tag |
外观 | 白色或类白色冻干粉 |
纯度 | ＞95% ,SDS-PAGE |
酶活 | ≥30U/mg冻干粉 |
保存条件 | 2℃~8℃ |
杂质残留 | 不含DNA和RNA，不含DNase和RNase 以λDNA为底物于37℃消化3小时以上未检测到脱氧核糖核酸酶活性。 以RNA为底物于37℃消化3小时以上未检测到核糖核酸酶活性。 |
单位活性定义 | 在37℃ pH7.5 条件下，每分钟可水解酪蛋白底物生成1µmol酪氨酸的蛋白酶K的量定义为一个单位（U）。每批次产品的酶活值见相应质检报告。 |
最适pH范围 | 7.5~11.5 |
最适温度范围 | 推荐温度范围是37~70℃，温度为70℃活性最高 |
激 活 剂 | 1~5mM Ca2+ |
抑 制 剂 | 二异丙基氟磷酸（DIFP），苯甲基磺酰氟（PMSF） |
灭活方法 | 反应体系中加入5mM的PMSF即可失活 |
稀释缓冲液 | 20mM Tris-HCl（pH 7.4），1mM CaCl 或20mM Tris-HCl（pH 7.4），1mM CaCl ，2%甘油 |
储存缓冲液 | 20mM Tris-HCl（pH 7.4），1mM CaCl ，50%甘油 |
使用方法 | 将蛋白酶K冻干粉配制成20-40mg/ml的溶液，在消化液或裂解液中添加蛋白酶K至终浓度为50-200µg/ml，根据需求不同作用时间可为30min-18h不等，长时间反应会出现蛋白酶K自我降解现象。 |
配制方法
1.将蛋白酶K固体溶解于稀释缓冲液中，配制成40-80mg/ml原液；
2.将原液用0.22µm滤膜的过滤器除菌过滤；
3.加入经高温高压灭菌好的甘油，配制成终溶液含50%甘油的蛋白酶K溶液；
注意：
此分子生物学级别的蛋白酶K冻干粉并非无菌制剂，上述步骤2和3需在无菌环境中操作。稀释缓冲液：20mM Tris-HCl（pH 7.4）, 1mM CaCl2, 2%甘油，此浓度为在最终溶液体积中的终浓度。
建议使用蛋白吸附性低的聚醚砜（PES）或聚偏二氟乙烯（PVDF）材质的滤膜进行除菌过滤。
蛋白酶K无菌溶液储存在24℃至-80℃的条件下均可保持酶活稳定。蛋白酶K溶液若需反复使用，需分装保存。
注意事项
1.为了您的安全和健康，使用时请穿好实验服，佩戴好防护手套和护目镜等进行操作。
2.该产品可能造成皮肤过敏反应。
3.蛋白酶K冻干粉容易吸潮，请密封保存。
参考文献
1. Kraus, E; et.al. Proteinase K from the Mold Tritirachium album limber, Specificity and Mode of Action. Z. Physiol. Chem., 357:939;1976.
2. Jany,KD, et.al. Amino Acid Sequence of Proteinase K from the Mold, Tritirachium album limber. Proteinase K; a Subtilisin-related Enzyme with Disulfide Bonds. FEBS Letter, 199,139.1986.
3. Bajorath, J., et al., The Enzymatic Efficiency of Proteinase K is Controlled by Calcium. Eur. J. Biochem., 176, 441-447 (1988).
