慢病毒载体（LVV）和腺相关病毒载体（AAV）的生产过程中，滴度低、稳定性差、纯化回收率低是常见难题。其中一个影响因素是生产体系中使用的辅料——传统血浆来源的人血清白蛋白（pHSA）批次差异大、存在病原体传播风险，且供应链受血浆供应制约。
重组人白蛋白（rHA）正在被越来越多的CGT企业纳入工艺方案。知禾泰克提供由母公司安睿特生产的重组人白蛋白，采用毕赤酵母表达体系、吨级产能、GMP合规、无动物源。以下从已发表的文献出发，梳理白蛋白在病毒载体生产中的应用依据。
人血清白蛋白在病毒载体生产和制剂中主要有三个用途：
滤膜钝化：纯化过程中病毒颗粒在滤膜表面易发生非特异性吸附和聚集，导致活性损失。白蛋白预处理滤膜后可减少这一现象。
蛋白稳定：在纯化、冻存和制剂过程中，白蛋白有助于维持病毒颗粒的构象和感染性。
无血清培养基组分：作为化学限定培养基的添加成分之一，支持HEK293T等生产细胞的培养。
Hosokawa等在2002年报告：纯化的腺病毒载体直接过无菌滤膜后活性完全丧失，添加1%白蛋白后病毒活性得到保留，过滤后可在4°C稳定保存至少2周[1]。
rHA与pHSA的主要差异
对比维度 | 重组人白蛋白（rHA） | 血浆来源HSA（pHSA） |
来源 | 毕赤酵母重组表达，无动物源 | 人血浆提取，受供体限制 |
病原体风险 | 无血源性病原体风险 | 经灭活处理，残余风险存在 |
TSE/BSE风险 | 无 | 理论风险存在 |
批间一致性 | 重组工艺批次差异较小 | 血浆来源批次间差异较大 |
工艺适配 | 可用于无血清/化学限定工艺 | 含人源成分，工艺更复杂 |
供应链 | 国产，自主生产 | 依赖血浆供应,60%以上需进口 |
已发表文献综述
1. HSA对AAV转导效率的影响
Wang等在Gene Therapy（2017）上报道：临床级人血清白蛋白与AAV2、AAV8、AAV9共孵育后，体外和体内转导效率均有提升——小鼠肝脏中萤光素酶表达量增加，肌肉组织中也观察到类似结果。机制分析显示，HSA可增加AAV与靶细胞的结合，但不影响中和抗体的识别。该研究同时确认，AAV与HSA共孵育后冻存3天，增强效果不受影响[2]。
图1：AAV8萤光素酶在小鼠肝脏的表达。左：PBS对照；右：HSA处理组（Wang et al., 2017, Gene Therapy）
2. 白蛋白结合域修饰AAV衣壳的研究
Wright在Molecular Therapy（2023）中提出：在AAV衣壳中插入白蛋白结合域（ABD），可使载体进入血液后被宿主白蛋白包裹，可能有助于逃避部分中和抗体的识别。文章提出ABD与白蛋白的亲和力存在一个适宜范围——过高会影响靶细胞结合，过低则保护不足。该假说还需要进一步实验验证[3]。
图2：AAV白蛋白结合域修饰策略示意图（Wright, 2023, Molecular Therapy）
3. rHSA在病毒载体辅料筛选中的表现
Eilts等在Virus Research（2023）中测定了30种辅料对Orf病毒载体稳定性的影响。结果显示：1%重组人白蛋白（rHSA）配合5%蔗糖在28°C以下可维持病毒感染性，在所测辅料中综合表现较好。同期在Vaccine上发表的姊妹篇研究也使用了rHSA作为稳定剂[4,5]。
图3：不同浓度rHSA（0%-2%）对ORFV感染性滴度的影响（Eilts et al., 2023, Virus Research）
4. rHA在AAV5冻干制剂中的应用探索
Vargas等在Journal of Pharmaceutical Sciences（2025）上发表了AAV5冻干制剂辅料筛选的可行性研究。在测试的几种配方中，rHA（10 mg/mL）+海藻糖配方在储存稳定性方面表现较好——衣壳完整性维持更好，外部DNA水平较低。羟基ectoine+海藻糖则在冻干后即刻保护效果更优[6]。
5. rHA在CAR-T制造中的应用
Morton等在Cell & Gene Therapy Insights（2025）中报告了重组人白蛋白用于T细胞制造的效果：患者来源CAR-T细胞扩增约2.4倍，冻存后活率>90%，DMSO用量降低40%，早期记忆表型保留更多[7]。
6. HSA对转染复合物稳定性的影响
Olden等在Cell & Gene Therapy Insights（2022）中报道，HSA有助于维持DNA-PEI转染复合物的粒径范围，在悬浮HEK293细胞中可改善慢病毒载体和AAV的生产效果[8]。
重组人白蛋白产品信息
安睿特生产的重组人白蛋白，采用毕赤酵母表达系统，无动物源。系列产品如下：
货号 | 等级 | 剂型 | HCP残留 | 效期 |
ART101S | 超纯 | 固体 | ≤10 ng/g | 36个月 |
ART101L | 超纯 | 液体20% | ≤10 ng/g | 36个月 |
ART102L | 超纯 | 液体20% | ≤10 ng/g | 24个月 |
ART103S | 高纯 | 固体 | ≤500 ng/g | 24个月 |
ART103L | 高纯 | 液体20% | ≤500 ng/g | 24个月 |
选型参考：细胞培养推荐ART103S/L，细胞冻存选择ART103S或ART101S，细胞制剂推荐ART101L/S。
质量控制
纯度 ≥99.0%（USP-NF2023）
HCP：超纯≤10 ng/g，高纯≤500 ng/g（ELISA）
内毒素 ≤0.125 EU/mg（LAL法）
微生物限度 ≤10 cfu/g
每批次附COA
储存与复溶
固体（ART101S/103S）：2-8°C避光防潮密闭保存
液体（ART101L/102L/103L）：2-8°C保存
干粉复溶：无菌蒸馏水或无菌PBS溶解至200 mg/mL，进一步稀释后分装
无菌溶液4°C可保存6-12个月
用途声明：本产品仅供科研、实验室及生产使用，不适用于人体/动物体内诊断或治疗。
参考文献
[1] Hosokawa K et al. J Virol Methods, 2002; 103(2): 191-199.
[2] Wang M, Sun J, Crosby A, et al. Gene Therapy, 2017; 24: 49-59.
[3] Wright JF. Molecular Therapy, 2023; 31(7): 1870-1873.
[4] Eilts F, Harsy YMJ, Lothert K, et al. Virus Research, 2023; 336: 199213.
[5] Lothert K et al. Vaccine, 2023; 41(32): 4731-4742.
[6] Vargas SK, Sharifi F, Nambayan R, et al. J Pharm Sci, 2025; 114(2): 1214-1223.
[7] Morton P, Jiang S. Cell & Gene Therapy Insights, 2025; 11(1): 89-100.
[8] Olden B et al. Cell & Gene Therapy Insights, 2022; 8(8): 985-992.
[9] Hughes O. MRes Thesis, University of Nottingham, 2024.
